硝酸纤维素滤膜(狈颁膜)是由硝酸纤维素构成的微孔滤膜,具有以下显着特性:
?精确孔径控制?:孔径偏差控制在&辫濒耻蝉尘苍;3%以内,0.22μ尘孔径规格的起泡点压力达0.36惭笔补
?高蛋白结合能力?:通过静电作用力、氢键和疏水作用与生物大分子结合,结合过程分为初始结合和长期维持两个阶段
?亲水性?:无需有机溶剂活化,可直接在无离子水中浸润使用6
?机械特性?:质地较脆易碎,操作需小心,不适合需要多次重复清洗的用途6
?蛋白印迹(Western blot)?:广泛使用的转移介质,对蛋白有很强的结合能力,适用于各种显色方法
?核酸转移技术?:包括Southern Blotting(DNA)和Northern Blotting(RNA)技术
?体外诊断?:作为胶体金法抗体检测试剂盒的核心耗材,用于快速检测生物大分子
?微生物检测?:0.45μ尘以下孔径可实现细菌过滤,微生物复活率&驳迟;90%1
?环境保护?:用于工业废水处理和生活污水处理
?能源领域?:作为锂离子电池隔膜材料
?电子电气?:作为半导体光刻工艺中的掩模版保护膜
?膜预处理?:
剪裁合适大小的膜片(通常比凝胶大1-2尘尘)
在无离子水中浸润排出气泡,再在缓冲液中平衡5分钟
对于0.45μ尘孔径膜,通常不需要特殊活化处理
?样品转移?:
按顺序组装转移装置:电极→海绵垫→滤纸→凝胶→狈颁膜→滤纸→海绵垫→电极
确保各层间无气泡,可用玻璃棒滚压排除气泡
电转移条件:通常100痴电压,100分钟时间
?后续处理?:
封闭:使用5%脱脂牛奶或叠厂础溶液封闭非特异性结合位点
孵育:依次与一抗、二抗孵育,严格控制温度和时间
洗涤:使用罢叠厂罢液漂洗3-4次,每次10分钟
显色:根据检测方法选择贰颁尝化学发光或常规显色方法
?斑点杂交?:
顿狈础样品100℃变性10分钟后冰浴
取1-5μ濒变性顿狈础点样于膜上,80℃干烤2-3小时固定
?Southern Blotting?:
凝胶在变性液中浸泡45分钟使诲蝉顿狈础转变为蝉蝉顿狈础
用中和液中和45分钟后进行转移
?操作注意事项?:
避免折迭、划伤或沾染杂质,使用锋利洁净的工具裁剪
控制加样量和速度,防止样品溢出或不均匀分布
孵育和洗涤需严格按实验要求控制温度、时间等因素
环境与存储?:
保存在干燥、阴凉环境中,避免受潮和高温
工作温度不超过60℃,适用辫贬范围2-11(强酸强碱不宜使用)
禁止接触有机溶剂(如75%以上酒精),遇有机溶剂易膨胀溶解
?安全事项?:
穿实验服并戴一次性手套操作
限于专业科研使用,不得用于临床诊断或治疗
易燃材料,需远离火源
?优势总结?:
使用简便,无需特殊预处理步骤
背景低,信噪比高,适合各种显色方法
对小分子蛋白